人PD-1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定
段文元
白云
张华欣
姜曼
黎万玲
1.第三军医大学医学遗传学教研室,重庆,4000382.第三军医大学医学遗传学教研室,重庆,4000383.第三军医大学医学遗传学教研室,重庆,4000384.第三军医大学医学遗传学教研室,重庆,4000385.第三军医大学医学遗传学教研室,重庆,400038
摘要：目的利用基因工程手段构建hPD-1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD-1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法扩增编码hPD-1膜外区的cDNA序列,将其与人IgGlFc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD-1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD-1-Fc的表达,经Protein A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物.结果 PCR扩增得到编码人PD-1全长的288aa编码基因片段,将其膜外区167aa的编码序列与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pcDNA3.1(+)表达质粒.重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清液中有hPD-1-Fc蛋白表达.纯化后的hPD-1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其相对分子质量约42800,与理论预测值相符.结论成功构建了hPD-1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hPD-1-Fc融合蛋白,为进一步研究PD-1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础.
关键词：PD-1-Fc基因工程真核表达
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30271246)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 460-462,467 )
英文信息