抗人肝癌单链抗体HAb25-scFv的构建及其表达
胡川闽1
李鹏1
陈安1
郭建秀1
刘彦仿2
1.第三军医大学医学检验系临床生化教研室,重庆4000382.第四军医大学病理学教研室,西安,710032
摘要：目的构建和原核表达抗人肝癌单链抗体HAb25-scFv,为其进一步的临床应用研究奠定基础.方法采用(Gly4Ser)3为连接肽,在pUC19质粒上构建HAb25-scFv单链抗体基因;序列分析证实后将HAb25-scFv基因亚克隆入pGFX4T-1GST融合表达载体上,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物并建立目的蛋白的纯化方法;免疫荧光竞争实验鉴定HAb25-scFv单链抗体的活性.结果序列分析证实在pUC19质粒上以(Gly4Ser)3连接肽成功构建了HAb25-scFv单链抗体基因;HAb25-scFv单链抗体基因在pGEX-4T-1 GST融合表达载体中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的60.8%;经GST亲和层析柱,可获得纯度达95.2%的GST-HAb25-scFv融合蛋白;免疫荧光竞争实验证实HAb25-scFv单链抗体具有与其亲本抗体相同的抗原结合特性,并至少保留了亲本抗体39.12%的亲合力.结论获得了HAb25-scFv单链抗体基因,并在原核GST融合表达系统中实现了HAb25-scFv的高效表达,免疫荧光竞争实验证实HAb25-scFv较好地保留了其亲本抗体的特异性和亲和力.
关键词：肝细胞肝癌单链抗体克隆表达
分类号：Q511(蛋白质)
资助基金：重庆市科委科研项目(2004BA5017)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 463-467 )
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