登革2型病毒NS3基因的酵母表达及其免疫反应性的测定
晏辉钧
江丽芳
方丹云
周经姣
郭辉玉
1.中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,5100802.中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,5100803.中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,5100804.中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,5100805.中山大学基础医学院微生物学教研室,广州,510080
摘要：目的克隆登革2型病毒(DEN2)NS3基因并用酵母真核表达,获得全长的重组NS3蛋白质,为其结构与功能的研究提供条件.方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清液中提取RNA,通过RT-PCR扩增NS3基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.结果 RT-PCR得到1.85kb的NS3基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长NS3基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达Mr约78 000的蛋白质,与DEN2多抗和登革2型病毒患者恢复期血清的免疫印迹证实它为型特异的重组NS3蛋白质.结论成功将克隆的全长DEN2 NS3基因在酵母菌中表达,获得的重组NS3蛋白质具有免疫反应性.
关键词：登革2型病毒NS3基因巴氏毕赤酵母基因表达抗体
分类号：R373.33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 482-484,488 )
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