EBV转化B型健康人B淋巴细胞构建噬菌体抗体库
岳建华1
潘秀珍2
王长军2
李先富2
唐家琪2
1.南京师范大学医学分子生物学实验室,南京,2100972.南京军区军事医学研究所流行病学研究室,南京,210002
摘要：目的构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库.方法应用EB病毒转化方法和噬菌体抗体库技术,从EB病毒转化成功的B型个体淋巴细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增VH和Vκ基因,经重叠延伸拼接法(SOE)组成ScFv基因并将其克隆入pCANTAB5E,转化E.coli TGI,加入辅助噬菌体M13KO7援救,构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库,并测定文库的库容、滴度及ScFv基因的插入率.使用完整A型红细胞对该库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,细胞ELISA、红细胞血凝实验对所获抗体进行初步鉴定.结果所构建的噬菌体抗体库,其库容为1.2×106,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为0.90,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为2.52×1010PFU/mL的初级噬菌体抗体库.以完整A型红细胞进行四轮淘筛,出现特异性富集.经细胞ELISA、红细胞血凝实验鉴定,得到2株与A型红细胞特异结合的ScFv噬菌体抗体.结论EB病毒转化方法联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库切实可行,可进行亲和筛选以得到人源抗红细胞A抗原的基因工程抗体.
关键词：EB病毒转化ScFv噬菌体展示技术
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30471600)国家自然科学基金(BK2003012)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 23-26 )
英文信息