NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定
徐祥1
梁华平1
刘昕2
李生茂1
史海水1
刘东擘1
吴强1
王正国1
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,4000422.第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室,重庆,400038
摘要：目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7 DNA-BD载体上,与GAL4 DNA-BD融合,形成GAL4 DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4 DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;最后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7 DNA-BD/p65BD载体.自1.28×107个酵母转化子中最终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序.EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应.结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应.
关键词：NF-κBp65酵母双杂交系统随机多肽库
分类号：Q503(一般性问题)Q51(蛋白质)Q58(生物体其他化学成分)
资助基金：科技部科研项目(G1999054203)中国科学院项目（非规范项目）(30080009,30200270)全军资助项目(2001-2005)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 132-136 )
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