Balb/c小鼠MBL-C糖识别域的原核表达及其多克隆抗体的制备
左大明
张丽芸
陈政良
1.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105152.南方医科大学免疫学教研室,广州,5105153.南方医科大学免疫学教研室,广州,510515
摘要：目的原核表达Balb/c小鼠肝型甘露聚糖结合凝集素(mMBL-C)糖识别域(CRD)并制备其多克隆抗体.方法应用PCR从含Balb/c小鼠MBL-C全长编码区基因的质粒pmMBL-C中扩增目的基因片段,构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达.分离纯化表达产物并免疫动物,制备mMBL-C CRD的抗血清,采用ELISA和Western blot鉴定其效价和特异性.结果从pmMBL-C中扩增到约450bp的DNA片段,构建重组载体pET-CKS-mMBL-C-CRD和pET32a-mMBL-C-CRD,经酶切和测序鉴定,证实重组表达载体构建成功.将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体的形式存在,相对分子质量(Mr)分别为44000和34 000.利用pET-CKS载体表达产物免疫家兔,分离免疫血清后,使用pET32a(+)载体表达产物进行ELISA及Western blotting,显示多克隆抗体能够与mMBL-C CRD蛋白特异结合.结论获得了重组mMBL-C CRD蛋白及其多克隆抗体,为mMBL-C分子以及CRD的研究奠定了一定的基础.
关键词：甘露聚糖结合凝集素糖基识别域原核表达多克隆抗体天然免疫
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：广东省自然科学基金(015003)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 256-259 )
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