人EGF受体胞外域在大肠杆菌中表达、复性及抗原性鉴定
徐丽慧1
洪岸2
何贤辉3
1.暨南大学生命科学技术学院,组织移植与免疫实验中心,广州,510632;暨南大学生命科学技术学院,生物工程研究所,广州,5106322.暨南大学生命科学技术学院,生物工程研究所,广州,5106323.暨南大学生命科学技术学院,组织移植与免疫实验中心,广州,510632
摘要：目的构建人EGF受体(EGFR)胞外域的原核表达载体并在大肠杆菌中表达,制备EGFR特异性抗体,对表达产物进行鉴定.方法以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码胞外结构域L1、S1、L2 (EGFR-LSL)的DNA片段,并在其3'端加入编码His6标签的序列,与pET-3c连接构建EGFR-LSL原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达;同时以纯化的EGFR L2结构域蛋白(EGFR-L2)制备抗血清,以此抗血清鉴定表达产物.结果 EGFR-LSL在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,抗His6抗体免疫印迹分析表明,表达产物全部以包涵体形式存在,通过Ni2+-NTA柱上复性获得纯化的可溶性EGFR-LSL蛋白;免疫印迹分析表明,EGFR-LSL与小鼠抗EGFR-L2抗血清具有高特异性反应.结论从大肠杆菌中获得具有特异抗原性的可溶性EGFR-LSL蛋白.
关键词：表皮生长因子受体胞外域原核表达包涵体抗原性
分类号：R392.12(医学免疫学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(30230350)国家科技重大专项(2002AA2Z3344)广东省科技攻关计划(2001A1090208)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 362-365 )
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