DC-SIGN荧光融合蛋白的构建、表达和生物学功能初探
王靖雪
张小萍
贾正才
耿淼
吴玉章
1.第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所,重庆,4000382.第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所,重庆,4000383.第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所,重庆,4000384.第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所,重庆,4000385.第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所,重庆,400038
摘要：目的构建绿色荧光蛋白(EGFP)标记的DC-SIGN分子(DC-SIGN-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达.方法 PCR方法获得DC-SIGN分子和EGFP分子的cDNA,分别克隆入真核表达载体pEGFP-N1和真核表达载体pCI, 使EGFP荧光蛋白分别位于DC-SIGN蛋白的C末端和N末端.在转染COS-7细胞后,在激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测重组分子的表达及融合蛋白在细胞定位情况.激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的功能情况.结果获得了预期的重组表达质粒, 经DNA测序证实开放阅读框正确,转染COS-7细胞后绿色荧光蛋白位于细胞膜,仅EGFP位于DC-SIGN N-末端的融合蛋白可被抗DC-SIGN抗体结合. EGFP位于DC-SIGN N-末端的融合蛋白可有效摄取DC-SIGN受体的高亲和力配体le(x)寡糖.结论所构建的DC-SIGN-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有细胞表面受体分子的特征性分布,可被抗DC-SIGN抗体检测及摄取特异性配体,为进一步深入研究DC-SIGN分子功能提供了良好的模型.
关键词：C-型凝集素DC-SIGN荧光融合蛋白重组表达le(x)寡糖
分类号：R392(医学免疫学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 370-373 )
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