抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达
毛旭虎
马颖
陈洪章
邹全明
1.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000384.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达.方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VH-Linker-VL,并在VH基因5'端和VL基因3'端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后, SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确.SDS-PAGE和Western blot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27 000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合.结论成功地实现了抗SLT2A scFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础.
关键词：志贺样毒素单链抗体分泌表达
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：军队科研项目(04J009)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 374-376,380 )
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