重组人IL-10融合蛋白的表达及其生物学活性测定
井申荣
邹全明
洪愉
毛旭虎
1.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000384.第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL-10.方法限制性内切酶Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切目的基因IL-10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL-10/pET32a,测序正确后转化E.coli BL21(DE3),不同温度、低浓度IPTG诱导工程菌表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达,ELISA和MC/9细胞增殖法分别测定IL-10的含量及生物学活性.结果构建的表达重组载体IL-10/pET32a经酶切鉴定和序列测定表明完全正确,诱导工程菌可以表达可溶性的融合蛋白IL-10-Trx,同时也存在包含体融合蛋白,经Western blot鉴定存在有目的蛋白IL-10,MC/9细胞增殖法测定可溶性的融合蛋白具有生物学活性.结论成功表达了具有生物学活性的融合蛋白IL-10-Trx,有助于下游纯化和制备hIL-10基因工程药物.
关键词：重组人白细胞介素10融合蛋白可溶性生物学活性
分类号：R392.2(医学免疫学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 399-401,405 )
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