脑膜炎大肠埃希菌侵袭素IbeA结合多肽的初步研究
曹虹1
陈丽丹2
林琳2
刘北一3
杨军2
贡树基2
李明4
1.南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系,广州,510515;南方医科大学生物技术学院,广州,5105152.南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系,广州,5105153.南方医科大学基础医学院,广州,5105154.南方医科大学生物技术学院,广州,510515
摘要：目的 脑膜炎大肠埃希菌(E.coli)侵袭素IbeA通过与脑微血管内皮细胞表面受体结合,从而介导细菌穿透血脑屏障引起新生儿细菌性脑膜炎.为通过肽库筛选获得与IbeA蛋白结合的多肽,建立噬菌体随机肽库筛选IbeA结合多肽模体的方法.方法 首先制备靶分子,用PCR扩增出全长ibeA基因序列,克隆至表达载体pET28a中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,经变性复性后通过Ni2+-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白.然后以固相化IbeA重组蛋白为靶亲和筛选噬菌体线性12肽库.结果 经过3轮淘选,得到能和IbeA结合的24个重组噬菌体克隆;挑选15个亲和力高的克隆进行DNA测序,对比分析所得的短肽序列.固相Fmoc法合成短肽,并进行结合实验、阻断实验和竞争抑制实验.结论 以重组表达的IbeA融合蛋白为靶筛选得到的重组噬菌体十二肽克隆,能够和IbeA蛋白结合,为IbeA蛋白结合多肽.结果 提示所筛选的阳性噬菌体克隆及其合成肽可能模拟IbeA受体表位的结构.
关键词：脑膜炎大肠杆菌lbeA蛋白表达噬菌体展示肽库结合多肽
分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：广东省自然科学基金(C020094)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 618-622 )
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