乙型肝炎病毒PreS1基因的原核表达及免疫学性质鉴定
张君
慕生枝
陈维贤
黄英
黄爱龙
唐霓
1.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,4000102.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,4000103.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,4000104.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,4000105.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,4000106.重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学实验室,重庆,400010
摘要：目的 构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体,获得高纯度、有生物活性的PreS1重组蛋白.方法 采用PCR法扩增PreS1及其N末端和C末端部分基因序列,克隆入原核表达载体pGST-MOLUC.重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测.用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶亲和层析纯化的重组融合蛋白免疫新西兰家兔,制备GST-PreS1融合蛋白的抗血清.进一步用ELISA分析融合蛋白特异抑制HBV病毒与抗体结合的能力.结果 重组质粒转化宿主菌后成功诱导出Mr39 000、31 000和32 000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融合蛋白,均与预期相对分子质量相符.Western blot检测获得特异的杂交条带.采用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶纯化的融合蛋白纯度约为90%左右.融合蛋白免疫家兔后抗体滴度达到10-7.病毒捕获ELISA实验表明,融合蛋白能特异抑制病毒与家兔免疫血清结合.结论 GST-PreS1融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,其纯化产物是研究PreS1基因在HBV感染过程中作用的有用工具.
关键词：乙型肝炎病毒PreS1基因原核表达
分类号：R512.8(传染病)
资助基金：国家自然科学基金(30400374)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5-8,12 )
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