野生型/突变型PSD-95真核表达载体的构建及其表达
齐静
邰剑敏
胡书群
侯筱宇
1.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏,徐州2210022.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏,徐州2210023.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏,徐州2210024.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏,徐州221002
摘要：目的 构建野生型和突变型PSD-95(postsynaptic density protein 95)的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞系中表达.方法 采用RT-PCR扩增大鼠PSD-95的cDNA,以PSD-95-GW1为模板,以PCR扩增PSD-95序列的突变体Myc-ΔSG(-SH3-GK)和Myc-ΔG(-GK),分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+).以脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的蛋白表达.结果 限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型/突变型PSD-95基因完全正确;免疫印迹法检测表明,转染的重组质粒能在COS-7细胞中高效表达.结论 构建的PSD-95-pcDNA3.1(+)、Myc-ΔSG-pcDNA3.1(+)和Myc-ΔG-pcDNA3.1(+)重组载体在COS-7细胞系中高效地表达,为深入研究PSD-95在缺血性脑损伤中的作用及机制打下基础.
关键词：PSD-95真核表达COS-7细胞
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)R743.3(神经病学与精神病学)
资助基金：国家自然科学基金(30300069)教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-04-0520;02KJB310011)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 20-22 )
英文信息