幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定
周维英
吴超
石云
张卫军
邹全明
1.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000384.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000385.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的 构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定.方法 采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和western blotting、ELISA检测、GM1活性检测.结果 成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97 %,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合.结论 Hp HpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性.为新一代Hp疫苗的研制奠定基础.
关键词：幽门螺杆菌黏附素尿素酶B亚单位大肠杆菌不耐热毒素B亚单位
分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)R392.1(医学免疫学)
资助基金：国家科技重大专项(2003AA2Z3C64)国家自然科学基金(30400406)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 121-125,130 )
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