重组金黄色葡萄球菌肠毒素 C2 的表达及生物学活性分析
应跃斌
李丹曦
潘映秋
薛乔
孙红颖
陈枢青
1.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,3100312.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,3100313.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,3100314.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,3100315.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,3100316.浙江大学药学院生物制药研究室,杭州,310031
摘要：目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析.方法 通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达.利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较.结果 表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列.含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白.SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯.MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性.结论 成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础.
关键词：肠毒素超抗原克隆表达组氨酸标签亲和纯化
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：浙江省科技厅资助项目(2004C13041)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 144-147,151 )
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