幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达
邓颖
杨致邦
王勇
黄进
张绍兰
叶翠莲
1.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,4000162.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,4000163.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,4000164.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,4000165.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,4000166.重庆医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,重庆,400016
摘要：目的 克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础.方法 用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化.结果 PCR扩增出807 bp的目的基因片段nctB.工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30 000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA 树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上.Western blot 显示重组蛋白质有良好的抗原性.结论 构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达.
关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位融合基因
分类号：R392.12(医学免疫学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 172-175 )
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