Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈
柴琳琳
万瑛
邹丽云
张晋宇
李娜
刘婷
李景怡
吴玉章
1.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000382.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000383.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000384.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000385.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000386.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000387.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,4000388.第三军医大学基础部全军免疫学研究所,重庆,400038
摘要：目的 建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响.方法 首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC Ⅰ类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;最后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化.结果 酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHCⅠ类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立.在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降.结论 成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础.
关键词：DCOVA内源抗原递呈Rab4
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30400392)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 239-242,247 )
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