RNA干扰体外抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究
汪光蓉1
张国元2
杨健3
胡为民3
唐恩洁3
朱道银4
1.川北医学院附属医院检验科,四川,南充,637000;重庆医科大学免疫微生物学教研室,重庆,4000162.川北医学院附属医院检验科,四川,南充,6370003.川北医学院分子生物研究所,四川,南充,6370074.重庆医科大学免疫微生物学教研室,重庆,400016
摘要：目的 针对乙型肝炎病毒(HBV)prec/c区构建shRNA表达载体,观察shRNA表达载体对HBV抗原表达的抑制作用,为运用RNA干扰(RNAi)技术治疗乙型肝炎奠定基础.方法 运用基因重组技术构建shRNA表达载体,经酶切,测序鉴定确认后,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染Hela细胞,并于转染后72 h,用微粒子酶免疫实验(MEIA)分别检测细胞上清液和细胞裂解液中HBsAg和HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/c mRNA的转录情况;分析shRNA表达载体对HBe/HBs抗原表达的抑制情况.结果 成功构建了针对HBV prec/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5、psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC;筛选到对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体,同时其对HBsAg的表达有促进作用;psiHBV5和psiHBV6对HBeAg的抑制作用相对较弱,其对HBsAg的表达也有不同程度的促进作用;无关干扰对照psiC对HBV两种抗原的表达均无显著抑制作用.结论 成功构建带U6启动子的shRNA表达载体并初步筛选到可显著抑制HBeAg表达的psiHBV4;本研究设计的3个靶向序列中,只有一个序列有大约70%的抑制率,而另外两个序列的抑制率相对较小,说明RNA干扰作用有较强的序列依赖性;无关干扰序列psiC几乎无干扰作用,说明siRNA产生的干扰作用具有高度的特异性.以上结果为应用RNAi治疗乙型肝炎奠定了一定的基础.
关键词：乙型肝炎病毒抗原shRNARNA干扰表达载体
分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：四川省教育厅项目(2003A066)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 311-315 )
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