重组蓖麻毒素A链的原核表达和单克隆抗体的制备、鉴定及应用
郭建巍1
王顺涛2
郭黎明2
冯健男2
马骢3
沈倍奋2
1.海军总医院检验科,北京,100037;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学实验室,北京,1008502.军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学实验室,北京,1008503.海军总医院检验科,北京,100037
摘要：目的 实现重组蓖麻毒素A链(rRTA)的高效表达,获得rRTA的单克隆抗体,建立基于单抗的蓖麻毒素检测方法.方法 用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物;用PCR将rRTA基因克隆至载体pE132a(+);用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定;IFTG诱导rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Westernblot鉴定rRTA蛋白;rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Westem blot鉴定.结果 构建了rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,实现了rRTA在大肠杆菌BL21中的高效可溶性表达,获得了高纯度约10～20 mg/L rRTA;获得抗rRTA的单克隆抗体;建立的ricin EIJSA检测方法检出ricin的最低浓度为3.125 ng/mL,目视比色对蓖麻毒素的最低检出浓度为6.25 ng/mL.结论 本研究表达的rRTA及其单克隆抗体和基于单抗的ricin检测方法,将在肿瘤生物治疗、ricin生物恐怖袭击的侦检、治疗和预防中发挥重要作用.
关键词：蓖麻毒素蓖麻毒素A链融合蛋白夹心EIJSA
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2004AA002020)中国博士后科学基金(2004035289)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 424-428 )
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