大鼠IP-10-PE38 KDEL重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达
孙岚1
祁志荣1
张琴1
林媛1
李明远1
张林2
蒋忠华1
李虹1
1.四川大学,基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,6100412.四川大学,华西医院生物治疗国家重点实验室,成都,610041
摘要：目的 构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH 3T3细胞中的表达情况.方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PTKL459K-IL-4-PT38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL.重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH 3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH 3T3细胞的表达.结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆人真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH 3T3细胞表达.结论 rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH 3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础.
关键词：rIP-10PE38KDEL重组免疫毒素NIH 3T3细胞真核表达
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2002AA214101)国家自然科学基金(30470613)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 482-485 )
英文信息