人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定
邓虎平
庄然
贾卫
张赟
张圆
户义
张新海
金伯泉
1.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100322.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100323.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100324.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100325.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100326.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100327.第四军医大学免疫学教研室,西安,7100328.第四军医大学免疫学教研室,西安,710032
摘要：目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.
关键词：CD226真核表达融合蛋白
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30672370)国家自然科学基金(30500219)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 499-501,505 )
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