抗淋巴样增强因子-1羧基端单克隆抗体的制备及其表位的初步鉴定
杨明珍1
李鹏1
张竹君1
易维京1
李淑慧1
赵利军2
胡川闽1
1.第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室,重庆,4000382.美国北卡罗来纳大学化学与生物化学系
摘要：目的 制备抗淋巴样增强因子-1(LEV-1)羧基端86个氨基酸(Lct86)特异性单克隆抗体,并初步明确其表位,为进一步研究LEF-1 C端特异序列的功能奠定基础.方法 从Jurkat细胞株中扩增LEF-1 C端特异序列eDNA,并克隆入PQE40、pET32a原核表达载体;分别转化入M15、BL21(DE3)感受态菌,IPIG诱导表达;纯化PQFAO-Lct86融合蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体,以pET32a-Lct86融合蛋白鉴定单克隆抗体特异性.LEF-1 C端特异序列不同长度的基因片段定向克隆人PQE40,鉴定各片段的表达,利用Western blotting初步鉴定单克隆抗体的表位.结果 成功构建了PQE40-Lct86、pET32a-Lct86重组原核表达载体;纯化获得PQE40-Lct86融合蛋白;得到一株特异性的抗LEF-1 C端单克隆抗体TMAb1,证实其表位位于437aa～454aa.结论 成功制备了一株特异性的抗LEF-1 C端单克隆抗体TMAb1,并鉴定其抗原识别表位位于437aa～454aa,为进一步研究LEF-1 C端的功能奠定基础.
关键词：LEF-1单克隆抗体表位
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30570373)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 142-145 )
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