猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究
刘丽娜1
胡福泉1
朱军民1
赵岩1
陈志瑾1
唐家琪2
1.第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆,4000382.第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆,400038;南京军区军事医学研究所,南京,210002
摘要：目的 表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性.方法 用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-fbp.该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化E.coli.Rosetta,IPIG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白.Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性.重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价.结果 PCR扩增的fbp基因长度约为1700 bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框.IPIG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%.亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上.Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应.重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1:25600以上.结论 成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌E.coli.Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.
关键词：SS2FBP表达免疫学活性
分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(20C6AA02Z455)国家自然科学基金(30700711)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 173-177 )
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