真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法
陆燕燕1
何金生2
张梅1
虞结梅1
谢灿1
袁媛1
薛绍礼3
宋蔚1
郑娴娴1
1.安徽医科大学免疫学教研室,合肥,2300322.安徽医科大学免疫学教研室,合肥,230032;北京交通大学理学院生物科学与技术研究所,北京,1000443.安徽医科大学生物技术教研室,合肥,230032
摘要：目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础.
关键词：人呼吸道合胞病毒F基因真核表达纯化
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(3047t519)教学改革项目(2007RC006)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 188-191 )
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