EHEC O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定
罗萍
曾浩
易勇
张卫军
郭鹰
刘璐
陈洪章
邹全明
1.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000382.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000383.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000384.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000385.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000386.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000387.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,4000388.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,400038
摘要：目的 构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性.方法 通过PCR反应从EHEC O157:H7 EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性.结果 成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的 蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1:16,Western blotting表明可与天然STx2A蛋白反应.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157:H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础.
关键词：O157H7STX2A1免疫原性
分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA02Z405)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 287-290 )
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