小鼠LIGHT胞外段基因原核表达质粒的构建及表达
张亚丽
江文正
樊燕
钱旻
1.华东师范大学生命科学学院,上海,2000622.华东师范大学生命科学学院,上海,2000623.华东师范大学生命科学学院,上海,2000624.华东师范大学生命科学学院,上海,200062
摘要：目的 构建含有LIGHT胞外段的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.方法 从由小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增LIGHT胞外段,克隆至原核表达载体pEF-24a(+)中,构建重组表达质粒pET24-LIGHYECD.重组质粒经酶切鉴定及序列测定后,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测.结果 RT-PCR扩增出了525 bp LIGHT胞外段的cDNA,经测序证实其序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出相对分子质量为20 000的LIGHT胞外段蛋白.结论 成功地克隆了小鼠LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达,为进一步研究LIGHT的功能打下了基础.
关键词：LIGHT基因克隆原核表达
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：上海市青年科技启明星计划资助项目(06QA14017)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 389-391,399 )
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