EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达
吴秀丽1
李扬秋1
朱康儿1
杨力建1
陈少华1
Piotr Grabarezyk2
Grzegorz K. Przybylski2
Christian A.Schmidt2
1.暨南大学医学院血液病研究所,广州,5106322.Ernst-Moritz-Arndt大学血液和肿瘤中心,Greifswald 17487,德国
摘要：目的 构建EBV特异性细胞毒T细胞(CIL)相关的TCR Vα-pIRFS-TCR Vβ真核双表达质粒.方法 通过RT-PCR和基因扫描技术分析EBV特异性CTL克隆的T细胞受体(TCR)Vα和Vβ谱系表达情况及T细胞克隆性,确定其优势表达的TCR Vα15和TCR Vβ1亚家族基因的核苷酸序列(包括CDR3互补决定区),PCR扩增出TCR Vα15和TCR Vβ1基因后,分别定向克隆入真核双表达载体pIRES,构建双顺反子重组质粒TCR Vα-pIRES-TCR、Vβ,转基因技术将其转染A549细胞和Molt4细胞,通过RT-PCR、实时定量PCR、流式细胞术和蛋白印迹分析检测TCR Vα15和TCR Vβ1基因的表达.结果 酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染重组质粒的细胞能够表达TCR Vα15和TCR Vβ1的mRNA及蛋白.结论 成功构建了EBV特异性的TCR Vα-pIRES-TCR Vβ双顺反子真核表达质粒,并在体外实现了共表达,为进一步的实验研究奠定了基础.
关键词：EBV转染细胞毒T细胞双顺反子
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2006AA02Z114)广东省自然科学基金面上项目(06025213)血液病学国务院侨办重点专科基金(51205002)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 412-416 )
英文信息