HSV-1 UL15 exon-Ⅱ的原核表达及抗体制备
陈灿煌
黎庶
金晓琳
朱晓艳
胡晓梅
周莹冰
丛延广
朱军民
陈志瑾
胡福泉
1.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000382.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000383.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000384.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000385.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000386.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000387.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000388.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000389.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,40003810.第三军医大学微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038
摘要：目的 构建pQE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ原核表达载体,在大肠埃希菌中高效表达并免疫家兔制备抗体.方法 以HSV-1感染后的Vero细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增HSV-1 UL15 exon-Ⅱ基因,克隆入原核表达载体pQE-31;重组质粒经酶切、测序鉴定无误后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE检测蛋白表达情况;表达蛋白用Ni-NTA亲和层析纯化及透析复性处理后免疫家兔制备特异性抗体,抗体的免疫原性用Western blotting进行检测.结果 通过RT-PCR扩增获得了HSV-1 UL15 exon-Ⅱ全长基因;构建的pOE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ重组质粒经酶切及测序鉴定无误;阳性转化菌株经WIG诱导后SDS-PAGE电泳显示表达蛋白的相对分子质量约为43 000,与理论值一致,蛋白表达率约为35%～40%;表达蛋白经纯化及透析复性后免疫家兔获得的抗血清经Western blotting鉴定具有较好的特异性和敏感性.结论 成功构建了pQE-HSV-1 UL15 exon Ⅱ原核表达载体,诱导蛋白表达并进一步用表达的蛋白制备了特异性抗体,为HSV-1末端酶全长基因表达情况的鉴定及最终构建抗病毒组装药物的分子筛选模型奠定了前期实验基础.
关键词：HSV-1末端酶原核表达抗体制备
分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：重庆市自然科学基金(CSTC;2006BB5059)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 43-47 )
英文信息