金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达
杨杰
饶贤才
侯瑞
胡晓梅
陈志瑾
丛延广
谭银铃
朱军民
周莹冰
胡福泉
1.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000382.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000383.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000384.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000385.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000386.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000387.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000388.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000389.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,40003810.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038
摘要：目的 设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-Tpase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础.方法 在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(Tgase)和转肽酶(Tpase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-Tpase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5a大肠埃希菌.经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用Sal I线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母.结果 采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873 bp的Tgase片段和1 044 bp的Tpase片段.以酶切连接构建的TG-Tpase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1 900 bp的融合片段,与预期结果 相符,测序表明序列和阅读框均正确.线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA.结论 成功构建了含TG-Tpase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提.
关键词：MRSATPaseTGase毕赤酵母
分类号：R378.11(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30571666)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 145-149 )
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