小鼠精子Sp17与IL-5融合蛋白的构建、表达及其免疫原性鉴定
张巧玉1
李晋涛2
李玉燕3
梁志清3
吴玉章2
倪兵2
史常旭3
1.解放军总医院第二附属医院妇产科;第三军医大学西南医院妇产科,重庆,4000382.第三军医大学,免疫研究所,重庆,4000383.第三军医大学西南医院妇产科,重庆,400038
摘要：目的 构建和表达小鼠精子蛋白Sp17与白介素5(IL-5)融合蛋白,并对其进行纯化和免疫原性鉴定.方法 采用PCR技术从质粒pGEM-1-IL-5中扩增IL-5基因片段,将其克隆至pET/Sp17原核表达载体中与Sp17基因融合,构建重组质粒pET/Sp17-IL-5,经酶切鉴定后转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni2+-NTA Agarose 纯化,SDS-PAGE检测、N端测序及Western blot;重组蛋白Sp17.IL-5免疫小鼠后ELISA检测小鼠血清特异性抗体.结果 成功构建小鼠精子蛋白Sp17与IL-5融合蛋白的高效表达质粒pET/Sp17-IL-5,重组工程菌pET-28a(+)-sp17-IL-5/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白相对分子量(Mr)约39 000,纯化后蛋白纯度达91%,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体.结论 Sp17-IL-5蛋白经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性,为新型Sp17避孕疫苗的研制奠定基础.
关键词：精子蛋白17白细胞介素5基因融合原核表达
分类号：R321.1(人体形态学)R34(基础医学)R392.2(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30000183)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 173-176 )
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