溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体在毕赤酵母中的表达
付建芳1
涂艳阳2
秦红3
黄威权3
1.第四军医大学西京医院内分泌科2.解放军63870部队医院3.第四军医大学组织胚胎学教研室
摘要：目的 构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌璎表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定.方法 从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank accession No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因.然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定.以甲醇进行诱导表达,表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定.结果 获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性.结论 构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体并成功表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.
关键词：溶藻弧菌单链抗体真核表达毕赤酵母菌
分类号：Q812.3(生物工程学(生物技术))
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2006AA100308)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 491-494 )
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