CCL20基因短发夹RNA表达载体转染人胚胎肾细胞的干扰效应
何升东
彭代智
何斌
刘敬
周新
王勇
王丽华
郑必祥
左海斌
1.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所2.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所3.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所4.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所5.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所6.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所7.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所8.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所9.第三军医大学西南医院全军烧伤研究所
摘要：目的 观察人CCL20基因短发夹RNA表达载体(pSCS-EGFP)转染人胚胎肾细胞(293FT细胞),以及对其表达CCL20mRNA和分泌CCL20蛋白的抑制作用.方法 用脂质体转染法把构建成功的3个pSCS-EGFP质粒(其中pSCS-EGFP-1为CCL20基因错配型,pSCS-EGFP-2和pSCS-EGFP-3均为CCL20基因特异型)转染到293FT细胞,24 h后分别用荧光显微镜照相和流式细胞仪检测293FT细胞的转染率.将未转染及分别转染3种质粒的293FT细胞培养48h,用TNF-α和IL-1β刺激培养24 h后,分别用荧光定量RT-PCR和ELISA法检测CCL20基因mRNA和蛋白的表达水平,计算其抑制率.结果 3种质粒(pSCS-EG-FP-1～3)转染293FT细胞的效率分别为(73.8±5.3)%、(50.0±4.8)%、(56.8±2.9)%.加细胞因子刺激下,3种载体对293FT细胞表达CCL20mRNA相应的抑制率分别为(18.53±34.44)%、(90.40±3.94)%和(92.50±6.15)%;上清中CCL20蛋白相应的抑制率分别为(14.88±17.39)%、(71.76±8.27)%和(88.56±1.74)%.未加细胞因子刺激下,CCL20 mRNA的相应抑制率分别为(61.37±11.72)%、(84.33±12.78)%和(80.27±15.84)%;CCL20蛋白的相应抑制率分别为(19.91±48.12)%、(-27.87±50.24)%和(87.21±8.36)%.结论 特异性CCL20shRNA表达载体能明显下调细胞因子刺激人胚胎肾细胞表达CCL20 mRNA及蛋白,该载体为研究肾移植排斥反应等CCL20相关性肾脏疾病的治疗提供了一定的实验基础.
关键词：CCL20RNA干扰短发夹RNA293FT细胞
分类号：R392.4(医学免疫学)
资助基金：科技部科研项目(2005CB522605)国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA02A121)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 642-645 )
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