人Eppin蛋白的基因克隆和原核表达
申子刚1
陈正琼2
何畏2
阎萍2
何海洋1
张记1
杨霞1
唐艳1
吴玉章1
梁志清2
李晋涛1
1.第三军医大学,基础部免疫学教研室2.第三军医大学,附属第二医院妇产科
摘要：目的 克隆人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,Eppin)基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中表达,并鉴定重组蛋白的免疫学活性.方法 采用RT-PCR克隆人Eppin基因,将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X,并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达.Amylose树脂预装柱层析法提纯重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出396 bp目的 基因片段Eppin.工程菌pMAL-c2X-Eppin经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为54 000与预期的一致,重组蛋白用Amylose树脂提纯,纯化蛋白的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.Western blot显示重组蛋白质有良好的免疫活性.结论 获得了Eppin融合蛋白在原核系统中的稳定表达,为后续深入研究其抗生育功能奠定基础.
关键词：人EppinRT-PCR原核表达重组蛋白
分类号：R711(妇科学)
资助基金：国家科技支撑计划(2006BAI03B12)国家自然科学基金(30400402;30571708)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 662-665 )
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