真菌β-葡聚糖受体Dectin-1胞外识别区的克隆和原核表达
孙雯雯
刘丁
王政
陈萍
王豪
成瑶
1.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,4000422.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,4000423.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,4000424.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,4000425.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,4000426.第三军医大学大坪医院感染控制中心,重庆,400042
摘要：目的 为探讨真菌β-葡聚糖受体胞外识别区相关基因的分子功能,对小鼠巨噬细胞上的Dectin-1基因进行克隆、原核表达及鉴定分析.方法 以小鼠巨噬细胞总RNA为模板.用RT-PCR扩增其Dectin-1基因的细胞外糖识别域,并重组到原核表达载体pET28a(+)中.转入E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot对目的 蛋白进行检测分析鉴定.结果 阳性重组质粒经Nde和Xho I双酶切得到552 bp和5 369 bp两条片段.重组质粒测序.与GenBank上的相应序列比对完伞一致.且输入片段读码框与表达载体读码框吻合.SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量为22 000;West-ern blot检测出特异性阳性信号.该蛋白可识别、绑定酵母多糖.结论 本研究成功构建了真菌β-葡聚糖受体胞外识别区基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达相应的蛋白,为进一步探讨该基因在真菌识别中的功能奠定了基础.
关键词：真菌β-箭聚糖蛋白表达Dectin-1
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：重庆市自然科学基金(2007BB5079)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 309-311,319 )
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