IL-12锚定修饰exosome的肾癌疫苗的制备及鉴定
张尧1
吴小侯1
陈刚1
罗春丽2
张家摸1
1.重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,4000162.重庆医科大学检验教研宣,400016
摘要：目的 制备IL-12锚定修饰exosomes(EXOs)的肾癌疫苗及其蛋白组成和功能鉴定.方法 将糖基化磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)信号肽序列与白介素12基因融合构建真核双表达质粒pBIG.激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测融合蛋白(GPI-IL-12)在肾癌细胞的表达.用超滤和蔗糖重水密度梯度离心法制备EXOs,透射电镜鉴定其形态,Westernblot鉴定其标志性分子热休克蛋白70(HSP70)和细胞间粘附分子(ICAM-1)及肾癌特异性抗原G250和GPI-IL-12的表达.ELISA测定EXOs负载IL-12的量.IFN-γ释放试验检测IL-12修饰的EXOs(EXO/IL-12)的功能.结果 真核双表达质粒pBIG构建成功,酶切鉴定及测序正确.稳定转染后,GPI-IL-12在肾癌细胞膜高表达.分离纯化的EXOs为类圆碟形、双层膜结构,直径30～80 nm,表达HSP70、ICAM-1、G250和GPI-IL-12.EIASA测定10μg,ml的EXOs含约(80±9.6)p咖l的IL-12,并能显著诱导T淋巴细胞产生IFN-γ.结论 pBIG质粒稳定转染肾癌细胞能制备EXO/IL-12疫苗.该疫苗表达GPI-IL-12,负载肾癌特异性抗原G250,能在体外显著诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ,可望成为治疗肾癌的新疫苗.
关键词：肾细胞癌Exosomes白细胞介素12肿瘤疫苗
分类号：R392(医学免疫学)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 344-348 )
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