小鼠PD-1胞外段的克隆、原核表达及活性分析
覃晓琳
刘朝奇
李斌
吕佰瑞
杨凡
1.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430022.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430023.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430024.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,4430025.三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002
摘要：目的 小鼠PD-1胞外段(ePD-1)原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究.方法 应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆PD-1胞外段基因,将其重组到原核表达载体pGEx-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-ePD-1,转化至E.coli DH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-ePD-1转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-ePD-1融合蛋白.利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的PD-1胞外段融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性.结果 成功构建重组质粒pGEX-4T-1-ePD-1,并在E.coil BL21(DE3)中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-ePD-1融合蛋白.流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖.结论 成功地克隆、表达和纯化了小鼠ePD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件.
关键词：小鼠PD-1胞外段融合蛋白蛋白纯化淋巴细胞增殖
分类号：R392-11(医学免疫学)
资助基金：三峡大学研究生科研创新基金(2009-36)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息