幽门螺杆菌Lpp20重组蛋白的表达、纯化及其免疫活性初步研究
靖吉芳
张艳
刘志杰
于文
1.南华大学病原生物学研究所,衡阳,4210012.南华大学病原生物学研究所,衡阳,4210013.南华大学病原生物学研究所,衡阳,4210014.南华大学病原生物学研究所,衡阳,421001
摘要：目的 表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)脂蛋白Lpp20基因的重组蛋白,并检测其免疫活性.方法 应用PCR技术从H.pylori标准株26695染色体DNA中扩增出Lpp20的编码基因片段.将其克隆至表达载体pGEX-6P-2上,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21中表达并进行GST亲和层析纯化,用Western blot方法检测纯化产物重组Lpp20(recombinant Lpp20,rLpp20)的免疫反应性.免疫C57BL/6小鼠后,以rLpp20为包被抗原建立间接ELISA法对免疫小鼠血清进行特异性抗体检测;ELISA双抗体夹心法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4水平;MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应等指标以分析rLpp20的免疫活性.结果 扩增的lpp20全长528 bp,与GenBank上公布的H.pylori 26695株lpp20序列作BLAST比较,结果完全一致;成功构建了pGEX-6P-2/Lpp20重组质粒,表达的rLpp20 Mr 43 000,纯化产物可被鼠抗H.pylori抗体识别;以rLpp20为包被抗原建立的间接ELISA法检测免疫小鼠血清,与对照组相比rLpp20免疫组可见阳性反应;rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4含量均明显升高;脾淋巴细胞增殖反应测定,rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数也明显升高,与对照组有明显差异.结论 rLpp20具有良好的免疫活性,在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答,为筛选高效的H.pylori疫苗抗原奠定了基础.
关键词：幽门螺杆茵Lpp20重组蛋白蛋白表达免疫活性
分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：湖南省自然科学基金面上项目(06JJ2093)湖南省教育厅优秀青年项目(08B067)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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