携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体的构建与鉴定
陈钢1
张绍祥1
岳娟娟2
杨星3
张正治1
1.第三军医大学基础医学部中心实验室,重庆,4000382.第三军医大学检验系药理学教研室,重庆,4000383.解放军第324医院肝胆外科,重庆,400020
摘要：目的 构建携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体.方法 应用基因重组手段.Sal I/Not I双酶切质粒pIRES2-EGFP-syno,得到含EGFP和人Synoviolin的基因片段,将其亚克隆至入门载体pENTR1A的多克隆位点内得到入门质粒pENTR1A-syno-egfp.采用LR重组酶将pENTR1A-syno-esfp和目的载体pLenti4/TO/V5-DEST进行重组反应,形成慢病毒表达载体pLenti4/TO/V5-DEST-syno-egfp.将pLenti4/TO/V5-DEST-syno-esfp与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞,包装产生慢病毒,以293FT细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果 PCR,酶切及测序结果表明慢病毒表达载体pLenti4/TO/V5-DEST-syno-egfp构建成功,转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光.包装的慢病毒原液滴度为1×108 TU/ml.结论 成功构建了EGFP和Synoviolin基因共表达的慢病毒表达载体,为Synoviolin基因的功能研究提供了高效稳定的转基因技术平台.
关键词：Synoviolin绿色荧光蛋白慢病毒表达载体
分类号：R322.73(人体形态学)R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30672122)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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