应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原
宋洁1
黎庶2
丛延广2
陈志瑾2
熊坤2
胡福泉2
1.400038重庆,第三军医大学基础部微生物学教研室;650307,成都军区昆明疗养院检验科2.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆,400038
摘要：目的 利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证.方法 提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3A Ⅰ不完全酶切后回收0.5～3 kb DNA片段,插入经其同尾酶BamH Ⅰ酶切及去磷酸化处理的pET-30 a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库.将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清.用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原.结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%.随机挑选文库中的2 000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原.结论 本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础.
关键词：猪链球菌2型体内诱导表达抗原基因表达文库
分类号：R378.1+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30700711)国家自然科学基金(30901282)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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