马乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达及间接ELISA的初步应用
王宇1
田志革2
欧阳凤菊1
郭巍2
相文华2
王世泽3
曲娟娟1
1.东北农业大学资源与环境学院,哈尔滨,1500302.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,1500013.哈尔滨市阿城区畜牧局,150030
摘要：目的 原核表达马乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E蛋白,建立JEV间接ELISA诊断方法.方法 根据GenBank(AF315119.1)公布的JEV SA 14-14-2株E蛋白基因序列设计一对引物.提取病毒RNA经反转录和RT-PCR扩增获得E蛋白编码基因片段,将该片段插入表达载体pET30a(+).转化BL21(DE3)后经IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测活性.以表达的E蛋白为包被抗原建立间接ELISA诊断方法.结果 获得约1 500 bp目的片段,与GenBank上的序列同源性100%,其表达产物相对分子质量约为60 000,Western blot结果显示该蛋白可与JEV阳性血清结合,具有免疫反应性.建立了间接ELISA检测方法,对不同省份的340份马血清进行检测,其中154份为阳性.结论 原核表达JEV的E蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA诊断方法特异性和灵敏性较好,可用于JEV的现地检测.
关键词：马乙型脑炎E蛋白原核表达间接ELISA
分类号：S852.652(动物医学（兽医学）)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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