Caveolin-1克隆、表达及其抗体的制备
李永超1
何剑1
王丹2
何浪2
1.攀枝花学院附属攀枝花市中西医结合医院,6170662.成都医学院生物医学系,610081
摘要：目的 运用基因工程方法制备Caveolin-1重组蛋白及其抗体,为研究Careolin-1的功能奠定基础.方法 构建原核表达载体pGEX-5X-1-Caveolin-1,酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性后,进行纯化.纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.结果 克隆得到的目的 基因片段大小与预期相符.重组Caveolin-1蛋白相对分子质量约为48 000,以包涵体形式存在Caveolin-1蛋白N端融合GST标签便于纯化及鉴定.获得的高纯度Caveolin-1融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1:10 000).结论 构建了高表达Caveolin-1蛋白的原核表达系统,制备的Caveolin-1重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Caveolin-1基因的生物学活性提供了实验材料和依据.
关键词：凹陷蛋白1原核表达纯化抗体
分类号：R392-33(医学免疫学)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息