热胁迫后家蝇幼虫cDNA文库构建与随机EST测序分析
刘红美1
张洁1
王贇1
付萍2
国果2
张勇2
吴建伟2
1.贵阳医学院医学生物技术教研室,5500042.贵阳医学院寄生虫教研室,550004
摘要：目的 构建家蝇幼虫cDNA文库,筛选重要免疫因子.方法 采用热激法处理家蝇3日龄幼虫,提取处理后培养24 h的家蝇幼虫总RNA,运用SMART技术构建cDNA文库并随机挑选克隆进行EST测序分析.结果 cDNA文库的滴度为1.2×106.PCR扩增鉴定显示所选的30个克隆均含有重组的插入片段,大小均大于1 kb.随机挑取192个克隆进行表达序列标签( EST)测序,有效序列为171条,根据EST测序结果计算文库重组率达94%.经序列拼接得到129个Unigenes.通过序列比对发现其中72个Unigenes与GenBank中的已知基因同源,并从中鉴定出热激蛋白、变态原、转铁蛋白、几丁质酶、副肌球蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制因子等重要免疫因子.结论 高质量的家蝇幼虫cDNA文库构建成功,该文库的构建将有助于家蝇热应激免疫相关功能基因分离和进一步研究.
关键词：家蝇热激cDNA文库Expressed Sequence Tags(ESTs)
分类号：Q966(昆虫生物化学)
资助基金：贵州省高层次人才科研条件特助项目(S 2004-17;Q 2005-4;C 2005-6)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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