新型示踪MHC-Ⅰ类分子方法的建立
李志海1
邹丽云2
熊锐华2
张晋宇2
李景怡2
谢谆怡2
秦瑶2
李青2
赵奇1
万瑛2
林治华1
1.重庆理工大学药学与生物工程学院,4000502.第三军医大学免疫研究所,重庆,400038
摘要：目的 采用位点特异性荧光蛋白标记技术建立新型示踪MHC-Ⅰ类分子的方法,比较TCtag和halotag在体细胞和抗原递呈细胞中示踪MHC-Ⅰ类分子的优缺点.方法 构建H-2Kb-TCtag和H-2Kb-halotag融合蛋白的真核慢病毒表达载体,转染293FT细胞制备病毒,将病毒分别感染体细胞293FT和树突状细胞系DC2.4细胞后,TCtag采用染料ReAsH和FlAsH染色,Halotag采用染料HaloTag(R)TMR染色,在激光共聚焦显微镜下观察H-2Kb的分布情况.结果 通过激光共聚焦显微镜观察发现:TCtag与染料ReAsH和FlAsH只在293FT细胞内是特异性的结合;Halotag与用染料HaloTag(R)TMR在293FT和DC2.4细胞内都是特异性结合的.结论 从结合特异性上来看,Halotag标记MHC Ⅰ类分子要优于TC-tag.
关键词：绿色荧光蛋白MHC-Ⅰ类分子Tetracysteine tagHalotag
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30871224)新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0780)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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