HIV-1 Nef基因在THP-1细胞的表达和活性检测
覃晓琳1
刘朝奇1
任东明2
韩莉2
杨凡3
1.湖北宜昌三峡大学分子生物学研究所,4430022.三峡大学医学院3.湖北省宜昌市第二人民医院放化疗科
摘要：目的 将HIV-1 Nef基因转染THP-1细胞,获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆,为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础.方法 将质粒peDNA 3.1(+)-Nef和pcDNA 3.1(+)(阴性对照)转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、细胞免疫荧光等方法检测目的 蛋白在真核细胞内的表达及定位,采用共转染法将荧光报告基因转染THP-1 Nef和THP-1 3.1细胞,通过测定荧光(RLU)值来评价Nef蛋白的生物学活性.结果 转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的THP-1细胞株,RT-PCR及Western blot结果表明Nef在真核细胞中成功表达,细胞免疫荧光结果显示,THP-1-Nef细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中.荧光酶标仪检测转染了HIV-1 LTR-Luc和NFK B-Luc荧光报告基因的THP-1-Nef和TTHP-1-3.1细胞的RLU值.结论 成功建立了THP-1-Nef细胞稳定表达细胞株,检测了其生物学活性,为进一步研究其作用机制实验奠定基础.
关键词：HIV-1 NefTHP-1细胞稳定表达荧光报告基因
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：湖北省卫生计生委科研项目(2007JX3B80)三峡大学硕士学位论文培优基金(201099064)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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