小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达
应林燕1
符州1
罗健1
陈艳2
王莉佳3
李欣3
1.重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心,4000142.上海复旦大学附属儿科医院,2011023.重庆医科大学附属儿童医院发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,400014
摘要：目的 构建含有小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因的重组腺病毒(AdCCR7),观察其体外感染DC2.4细胞效率.方法 将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基闪的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA.带绿色荧光蛋白腺病毒(AdGFP)和AdCCR7分别感染DC2.4(GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4),同时设未处理DC2.4为空白对照.流式细胞术(FCM)检测各组细胞表面分子CDllc,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能.结果 获得滴度约为1.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7.AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCLl9的趋化率可达44.7%～60.O%,明显高于其它两组.结论 成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCLl9的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础.
关键词：CCR7DC2.4腺病毒
分类号：R392.12(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30600684)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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