FHR4抗体的制备与初步鉴定
张迎春1
刘莹2
杨金菊2
柳晓兰2
迟俊2
刘静2
高建恩2
唐晓波3
朱大岭3
孙启鸿2
1.102206,北京,蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心抗体工程研究室军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室;150081,哈尔滨医科大学药学院2.蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心抗体工程研究室军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室,北京,1022063.哈尔滨医科大学药学院,150081
摘要：目的 制备Complement factor H4(FHR4/CFHL4)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定.方法 以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-FHR4和PET-32a-FHR4.GST-FHR4融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,作为免疫原制备兔多抗和鼠单抗.采用ELISA法和Western blot鉴定抗FHR4兔抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性.采用蛋白印迹,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性.结果 GST-FHR4融合蛋白在相对分子质量约58 000处呈现明显表达条带.Western blot鉴定表明,制备的抗FHR4兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中相对分子质量约37 000和45 000的FHR4蛋白.获得2株可稳定分泌抗FHR4的杂交瘤细胞株可识别重组人FHR4蛋白,同时可特异性结合HepG2细胞浆中的蛋白和成人肝脏组织肝细胞浆中的蛋白.结论 成功制备出兔抗人FHR4抗血清和2株抗FHR4的mAbs,为进一步研究FHR4的功能奠定了基础.
关键词：Complement factor H4原核表达多克隆抗体单克隆抗体
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2006AA02A311)国家科技支撑计划(2008BAI63B03)国家自然科学基金(30600738)国家重点实验室基金(SKLP-Y200907)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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