应用Profinity eXact标签在真核衷达系统中纯化EGFP蛋白
李青
张强
邹丽云
吴玉章
万瑛
1.第三军医大学基础部全军免疫研究所,重庆,4000382.第三军医大学基础部全军免疫研究所,重庆,4000383.第三军医大学基础部全军免疫研究所,重庆,4000384.第三军医大学基础部全军免疫研究所,重庆,4000385.第三军医大学基础部全军免疫研究所,重庆,400038
摘要：目的 研究Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中的纯化效果.方法 通过PCR扩增Profinity exact标签,构建中间载体pUC18ETagEGFP,构建Profinity eXact标签绿色荧光蛋白真核表达载体FUETagEGFP,采用DNA-磷酸钙方法转染293FT细胞,收集过量表达Profinity eXact标签绿色荧光蛋白的细胞,随后提取蛋白进行纯化,采用荧光检测EGFP蛋白结合、纯化效率,最后利用SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度.结果 经PCR扩增、酶切和测序,Profinity eXact标签、中间载体pUC18ETagEGFP、Profinity eXact标签真核表达载体构建正确,经荧光显微镜镜下观察Profinity eXact标签真核表达载体转染293FT细胞效果良好,经荧光检测确定EGFP蛋白结合、纯化效率,经SDS-PAGE发现Profinity eXact标签在真核蛋白系统中纯化效果良好.结论 Profinity eXact标签在真核蛋白表达系统中能正常工作,并有较好的纯化效果.
关键词：真核表达亲和纯化Profinity eXact tag
分类号：Q51(蛋白质)
资助基金：国家自然科学基金(30871224)国家自然科学基金(30972802)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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