肠出血性大肠埃希菌O157:H7TCCP蛋白与宿主细胞IRTKS蛋白的相互作用
蒋明明1
顾江2
王海光2
鲁东水2
张卫军2
罗萍2
童文德2
邹全明2
毛旭虎2
1.400038,重庆,第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物及免疫学教研室;202155上海,解放军第94797部队卫生队2.第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物及免疫学教研室,重庆,400038
摘要：目的 通过体外结合实验验证EHEC O157:H7内膜素受体偶联细胞骨架蛋白重复片段与人肠上皮细胞IRTKS蛋白SH3结构域之间的相互作用,并制备二者蛋门复合体,为利用晶体学方法研究其相互作用奠定基础.方法 将IRTKS蛋白的SH3结构域cDNA序列克隆至pET30a表达质粒,转化BL21(DE3),诱导表达纯化SH3(IRTKS)蛋白;制备TCCP重复片段TC-CP(3R)蛋白;将SH3(IRTKS)与TCCP(3R)按照不同比例混合后,非变性丙烯酰胺凝胶电泳鉴定两者相互结合后产物;利用分子筛层析收集标准蛋白、TCCP(3R)、SH3(IRTKS)和TCCP(3R)-SH3(IRTKS)复合体的出峰体积,回归计算复合物的分子量,分析蛋白相互结合的比例.结果 成功克隆表达了SH3(IRTKS)重组质粒;并制备了高纯度的SH3(IRTKS)和TCCP(3R)蛋白;非变性丙烯酰胺凝胶电泳结果证实TCCP(3R)与SH3(IRTKS)发生相互作用形成了蛋白质复合体;复合体的分子量约为33 000,二者相瓦结合的比例约为1:1.结论 本研究为TCCP重复片段与SH3(IRTKS)相互作用提供了直接证据,同时复合体的制备,为利用晶体学研究两者的相互作用奠定了基础.
关键词：EHEC O157:H7TCCPIRTKS重组表达蛋白质复合体
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30670107)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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