携eGFP及表达人gp100-TCR基因的慢病毒表达载体的构建与鉴定
丁洁
王燕
1.南京市疾病预防控制中心,2100032.南京市疾病预防控制中心,210003
摘要：目的 构建携eGFP的人gp100-TCR基因慢病毒表达载体.方法 应用基因重组手段,从pGCsamgp100APB质粒上扩增出人gp100-TCR片段,将其插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,同时将其U6启动子替换为EF-1a启动子,形成慢病毒表达载体pLL3.7-gp100TCR-pEf-1a.将其与包装质粒混合,采用磷酸钙转染法转染293FT细胞,包装产生慢病毒,荧光显微镜观察GFP蛋白的表达水平.检测病毒滴度.结果 PCR、酶切及测序表明慢病毒表达载体pLL3.7-gp100TCR-pEf-1a构建成功.转染后的293FT细胞在荧光显微镜观察可见强绿色荧光,形成的慢病毒可感染293FT细胞,包装的慢病毒浓缩后滴度为45×106TU/ml.结论 成功构建eGFP和gp100-TCR共同表达的慢病毒表达载体,为gp100-TCR在肿瘤治疗中的功能研究提供了有效平台.
关键词：慢病毒表达载体gp100T-细胞抗原受体绿色荧光蛋白
分类号：R322.73(人体形态学)R34(基础医学)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息