HIV-1Tat调控MCAK基因启动子活性及作用位点的鉴定
孙薏1
周平坤2
呼永河1
张聪1
陈健1
匡红1
冯怀志1
李硕1
黄越承2
1.解放军第452医院肿瘤血液中心,成都,6100212.军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850
摘要：目的 研究HIV-1 Tat对MCAK启动子活性及基因表达的抑制作用,并鉴定Tat与MCAK启动子的作用位点.方法 利用原核表达的Tat蛋白处理A549细胞,通过Western印迹技术验证HIV-1Tat对MCAK基因表达的抑制作用;构建MCAK启动子-荧光素酶载体,转染A549细胞,通过荧光素酶活性分析Tat对启动子活性的调控作用;运用染色质免疫沉淀法(CHIP)分析Tat与MCAK启动区的相互作用,并进一步通过凝胶阻滞实验(EMSA)确定Tat与MCAK启动区的结合位点.结果 Western印迹实验证实Tat对MCAK表达具有强烈的抑制作用;荧光报告质粒检测系统分析表明在Tat存在的情况下,MCAK的核心启动子活性受到明显的抑制,其效应具有明显的剂量依赖性;CHIP和EMSA实验确定Tat蛋白与MCAK基因启动子区的直接相互作用,MCAK基因-337-232区域存在Tat蛋白的结合位点.结论 HIV-1 Tat对MCAK基因表达具有强烈的抑制作用,并与Tat蛋白结合于MCAK启动区-337～-232区域,从而导致MCAK启动子活性降低有关.
关键词：HIV-1 TatMCAK染色质免疫沉淀电泳迁移位移试验
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国际原子能机构合作项目(12510/RO)国家自然科学基金(30400120)四川省卫生厅科研项目(090175)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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